Desarrollo de un método downstream de concentración y purificación antigénica por ultracentrifugación de vacunas antirrábicas de segunda y tercera generación

Abstract

La rabia es una enfermedad que, una vez presente la sintomatología típica, tiene una altísima mortalidad, causada por el virus de la rabia (RABV). La vacunación es la única forma de prevenirla. Este proyecto, continúa la línea del PICYTD 2016 (“Desarrollo de técnicas de downstream para la obtención a escala de vectores virales recombinantes”) y está basado en el desarrollo de otra técnica downstream de concentración/purificación antigénica con el fin de comparar ambas metodologías y optimizar la plataforma productiva de vacunas virales tomadas como modelo. El Servicio Vacuna Antirrábica de la ANLIS Malbrán tiene vasta experiencia en el desarrollo de vacunas antirrábicas de 2º generación, basadas en amplificación viral sobre cultivos celulares e inactivación. También realiza trabajos en cooperación con el INTA. Como resultado de esta interacción se desarrolló un vector poxviral recombinante que expresa la proteína G de RABV: virus vaccinia Ankara modificado (MVA-RG). Nuestro grupo de investigación demostró que induce protección frente a RABV en el modelo murino. Se parte de la hipótesis que la concentración por ultracentrifugación de los antígenos vacunales RABV inactivado (VRI) y MVA-RG correlaciona con un aumento de los niveles de protección frente al desafío con virus rábico. Los virus RABV y MVA-RG fueron amplificados sobre cultivo de células BHK-21. RABV se inactivó químicamente. Ambos stocks fueron sometidos a un método de concentración y purificación por ultracentrifugación. Se evaluaron y optimizaron parámetros tales como tipo, tiempo y velocidades de centrifugación para cada virus. Para evaluar el grado de purificación y la concentración antigénica se realizaron SDS-PAGE y Western Blot. Se llevaron a cabo pruebas de potencias comparativas en modelo murino (método NIH) antes y después de la concentración antigénica. Finalmente, se compararon los resultados obtenidos para definir un protocolo de concentración.