Desarrollo de una plataforma para la producción de proteínas recombinantes de interés biotecnológico. Producción de ADN Polimerasas termoestables para la amplificación de ácidos nucleícos

Abstract

Desde el punto de vista de procesos de interés biotecnológico, la expresión de proteínas recombinantes involucra por lo general la síntesis y purificación de grandes cantidades de una proteína en particular, utilizando, mediante la tecnología del ADN recombinante, sistemas de expresión específicos para diferentes huéspedes, bacterias, células de mamífero, células de insectos, levaduras, etc. En el contexto de la carrera de Licenciatura en Biotecnología de la Universidad de Moreno, es de fundamental relevancia el uso de enzimas para la síntesis y modificación de ácidos nucleicos con el fin de llevar a cabo trabajos prácticos de diferentes disciplinas, realizar tareas de investigación y desarrollo de metodologías de diagnóstico, con el potencial de realizar extensión de servicios hacia la comunidad. Entre las metodologías más difundidas en biotecnología y diferentes ciencias biológicas afines, se encuentran la amplificación de ácidos nucleicos utilizando enzimas altamente purificadas que tienen actividad de polimerasas, las cuales son aplicadas en diversas técnicas, tales como la de amplificación de ADN por medio de la ADN polimerasa (PCR), la conversión de moléculas de ARN a ADN por medio de la transcriptasa reversa (retrotranscripción, RT), o amplificación isotérmica de ADN por medio de una ADN polimerasa específica (LAMP, del inglés “Loop-mediated isothermal Amplification”). Considerando que este grupo de enzimas son muy utilizadas tanto en docencia, investigación científica y diagnóstico mediante técnicas moleculares, es de gran interés por lo brevemente expuesto, obtener fuentes confiables de dichas enzimas de manera local para poder cubrir necesidades en el ámbito académico, para poder llevar adelante prácticos orientados a docencia, aplicar estos reactivos en diferentes desarrollos y tener disponibilidad de dichas enzimas para el diagnóstico local de patógenos de interés veterinario y humano. El Proyecto tiene como objetivo general la Producción a escala de ADN polimerasas termoestables recombinantes. Objetivos específicos: Producción, purificación, análisis de actividad y estabilidad de la Taq ADN polimerasa expresada en E. coli. Clonado y expresión de las enzimas Pfu y Bst ADN polimerasas en E. coli. Purificación, análisis de la actividad y estabilidad. Escalado de la producción de las tres enzimas.