Ingenierización De La Proteína Vp6 de rotavirus para optimizar la purificación de vlps recombinantes

Abstract

Las partículas semejantes a virus (VLPs) están formadas por proteínas de origen viral capaces de autoensamblarse en partículas multiméricas que imitan la estructura del virus del cual derivan. Como carecen de material genético, no son infecciosas y por lo tanto muy seguras en su producción y manipulación. Esto las convierte en un reactivo biológico muy atractivo tanto para la formulación de vacunas como su uso para kits de diagnóstico. En especial, las VLPs basadas en la proteína VP6 de rotavirus, se pueden utilizar como fuente de antígeno en ensayos de ELISA o para la producción de sueros específicos para el diagnóstico serológico. La obtención de VLPs de rotavirus se basa en la expresión de las proteínas VP6 y VP2 en el sistema baculovirus-células de insecto. Las proteínas VP2 y VP6 se autoensamblan formando VLPs. El paso crítico en la purificación de estas VLPs es separarlas de la progenie viral de baculovirus recombinantes que se producen en el sistema. Para esto se requiere de pasos de ultracentrifugación en colchón de sacarosa y gradiente de CsCl, lo que lo convierte en un sistema de purificación poco eficiente para la producción en gran escala. Existe bibliografía que demuestra que es posible insertar epitopes foráneos en posiciones aminoacídicas determinadas de la proteína VP6 sin afectar su capacidad de formar multímeros. Este plan propone la inserción de un tag de 6X-His usado habitualmente en la purificación de proteínas recombinantes, en la posición aminoacídica 311 de VP6, la obtención de un baculovirus recombinante que exprese VP6-311His, comprobar que esta proteína recombinantes forma VLPs junto con VP2 y evaluar su purificación mediante la interacción con una resina de Niquel (IMAC) gracias a la presencia y exposición del tag de His.